2차원 전기영동편집자 확인

2차원 전기영동의 첫 번째 단계인 1차원 분리는 등전점 초점화(IEF)를 통해 수행된다. 이 과정에서는 단백질 혼합물을 등전점(pI)에 따라 분리한다. 등전점 초점화는 pH 구배가 형성된 겔 내에서 단백질에 전압을 가해 움직이게 하는 원리를 사용한다. 각 단백질은 주변 pH가 자신의 등전점과 일치하는 위치에서 전하를 잃고 이동을 멈추게 되어, 최종적으로 등전점 순서대로 선상의 밴드로 분리된다.

1차원 분리를 위한 샘플 준비는 매우 중요하다. 단백질 추출물은 변성제와 계면활성제, 환원제를 포함한 용액에 용해되어야 하며, 이는 단백질을 변성시키고 응집을 방지하여 등전점 초점화의 효율을 높인다. 준비된 샘플은 보통 아가로스 겔이나 폴리아크릴아마이드 겔로 만들어진 스트립 형태의 IEF 캐리어에 로딩된다. 이 스트립에는 암포라이트라고 불리는 완충 용액이 포함되어 있어 전기영동 중에 안정적인 pH 구배를 형성하는 데 기여한다.

분리 과정은 전문 전기영동 장치에서 이루어진다. 샘플이 로딩된 IEF 스트립은 장치에 장착되고, 설정된 전압 프로그램에 따라 수 시간에서 하루에 걸쳐 전기영동이 진행된다. 전기영동이 완료되면, 단백질은 각자의 등전점을 따라 스트립 길이 방향으로 선형적으로 분포하게 된다. 이렇게 얻어진 1차원 분리 스트립은 이후 두 번째 차원의 분리를 위해 SDS-PAGE 겔에 평행하게 놓이게 된다.

2차원 분리는 2차원 전기영동의 핵심 과정으로, 단백질 혼합물을 두 가지 독립적인 물리화학적 성질에 따라 연속적으로 분리한다. 이 과정은 크게 1차 분리와 2차 분리로 나뉘며, 이를 통해 단백질을 단일 스팟 형태로 고해상도 분리할 수 있다.

1차 분리 단계에서는 등전점 초점화가 사용된다. 이 과정에서 단백질은 pH 구배가 형성된 겔 내에서 이동하다가 각자의 등전점에 도달하면 전하가 0이 되어 멈추게 된다. 결과적으로 단백질은 주로 전하, 즉 등전점(pI)에 따라 1차원적으로 분리된 띠 형태를 이루게 된다.

이어지는 2차 분리 단계에서는 SDS-PAGE가 수행된다. 1차 분리가 끝난 겔 스트립을 SDS와 베타-머캅토에탄올이 포함된 완충액에 처리하여 단백질을 변성시킨 후, 이를 두 번째 폴리아크릴아마이드 겔의 상단에 놓는다. 두 번째 전기영동이 진행되면, SDS가 결합한 단백질들은 분자량에 비례한 이동도를 보여 분자량에 따라 수직 방향으로 분리된다. 최종적으로 단백질은 겔 위에 분산된 여러 개의 점(스팟) 형태로 나타난다.

이러한 2차원 분리 방식을 통해 수백에서 수천 개에 이르는 단백질을 한 번의 실험으로 분리할 수 있으며, 이는 복잡한 세포 추출물이나 조직 샘플의 단백질체를 분석하는 데 필수적이다. 분리된 단백질 스팟의 패턴은 생물학적 샘플 간의 단백질 발현 차이를 비교 분석하는 데 직접적으로 활용된다.

2차원 전기영동을 통해 분리된 단백질 스팟을 검출하고 분석하는 과정은 실험의 최종 목표인 단백질 식별과 정량을 위한 핵심 단계이다. 분리가 완료된 겔은 먼저 다양한 염색법을 통해 가시화된다. 쿠마시 블루나 실버 염색과 같은 전통적인 염색법이 널리 사용되며, 형광 염색은 더 높은 감도와 넓은 선형 범위를 제공하여 정량 분석에 유리하다. 특히 차별적 형광 표지를 이용하면 서로 다른 샘플의 단백질 발현량을 단일 겔 내에서 직접 비교할 수 있어 단백질체학 연구에서 매우 유용하게 활용된다.

검출된 단백질 스팟 패턴은 이미지 스캐너를 통해 디지털 이미지로 획득된 후, 전용 소프트웨어를 사용해 분석된다. 분석 과정에는 여러 겔 이미지 간의 정렬, 스팟 검출, 스팟 정량, 그리고 통계적 비교가 포함된다. 소프트웨어는 수백에서 수천 개에 이르는 스팟을 자동으로 찾아내고, 각 스�트의 강도(발현량)를 계산하며, 서로 다른 실험 조건(예: 정상 대 질병) 간에 발현량이 유의미하게 증가하거나 감소한 차등 발현 단백질을 찾아낸다.

이렇게 식별된 관심 스팟은 질량 분석법으로 이어지는 하류 분석의 대상이 된다. 해당 스팟을 겔에서 절취한 후, 트립신과 같은 효소로 절단하여 펩타이드 혼합물을 생성한다. 이 펩타이드들은 매트릭스 보조 레이저 탈착 이온화 또는 전자 스프레이 이온화와 같은 기술로 질량 분석기에 주입되어 정확한 질량을 측정받는다. 얻어진 질량 데이터는 단백질 데이터베이스를 검색하여 해당 단백질을 최종적으로 동정하는 데 사용된다. 이를 통해 특정 생리적 또는 병리학적 상태와 연관된 바이오마커 후보 단백질을 발견할 수 있다.

IEF/SDS-PAGE는 단백질 혼합물을 분석하는 대표적인 2차원 전기영동 기법이다. 이 방법은 단백질을 두 가지 서로 다른 물리화학적 성질, 즉 등전점과 분자량에 따라 순차적으로 분리한다. 첫 번째 차원의 분리에는 등전점 초점화가 사용되며, 이 과정에서 단백질은 각자의 등전점에 도달할 때까지 pH 구배가 형성된 겔 내에서 이동하여 최종적으로 해당 pH 위치에 집중된다. 이렇게 1차원에서 분리된 단백질 밴드는 이후 두 번째 차원의 분리를 위해 SDS-PAGE 겔에 놓이게 된다.

두 번째 차원의 분리는 SDS-PAGE에 의해 수행된다. 이 단계에서는 단백질 시료가 SDS와 같은 계면활성제로 처리되어 모든 단백질이 음전하를 띠게 되고, 형태도 변성된다. 그런 다음 겔에 전기장을 가하면 단백질은 순수하게 분자량의 크기에 따라 이동 속도가 달라져 분리된다. 결과적으로 최종 겔 위에는 수백에서 수천 개의 단백질 점들이 2차원 지도처럼 분포하게 되며, 가로축은 등전점(pI), 세로축은 분자량에 해당하는 정보를 제공한다.

이 기법은 단백질체학 연구의 핵심 도구로, 세포나 조직의 전체 단백질 집합체를 한 번에 분석하는 데 필수적이다. 복잡한 생물학적 시료 내의 수많은 단백질을 고해상도로 분리할 수 있어, 서로 다른 조건이나 상태에서의 단백질 발현 양상을 비교하는 데 널리 활용된다. 특히 질병 바이오마커를 탐색하거나 단백질의 번역 후 변형을 연구하는 데 중요한 역할을 한다.

SDS-PAGE/SDS-PAGE는 단백질 혼합물을 두 차례의 SDS-PAGE 과정을 거쳐 분리하는 2차원 전기영동 기법이다. 이 방법은 단백질을 1차원에서는 분자량에 따라, 2차원에서는 다시 분자량에 따라 분리하지만, 두 단계에서 사용하는 겔의 농도나 조건을 달리하여 추가적인 분해능을 얻는다. 예를 들어, 첫 번째 SDS-PAGE에서는 낮은 농도의 겔을 사용해 큰 단백질을 분리하고, 두 번째에서는 높은 농도의 겔을 사용해 작은 단백질을 더 세밀하게 분리할 수 있다.

이 기법은 주로 특정 크기 범위 내의 단백질을 매우 고해상도로 분리하고자 할 때 사용된다. 특히 단백질체학 연구에서 단백질의 이소형이나 번역 후 변형에 의해 분자량은 유사하지만 미세한 차이를 보이는 단백질들을 구별하는 데 유용하다. 또한 단백질 복합체의 하위 단위체 분석이나 특정 바이오마커 탐색에도 적용될 수 있다.

SDS-PAGE/SDS-PAGE의 주요 장점은 등전점 초점화를 필요로 하지 않아 비교적 간단하고 빠르게 수행할 수 있으며, SDS-PAGE에 익숙한 연구자들이 쉽게 접근할 수 있다는 점이다. 그러나 IEF/SDS-PAGE와 같은 표준 2차원 전기영동에 비해 단백질의 등전점 차이에 기반한 분리 능력이 없어, 분자량이 매우 유사한 단백질들을 구분하는 데 한계가 있을 수 있다.

Chromatofocusing/SDS-PAGE는 단백질 혼합물을 분석하기 위한 2차원 전기영동 기법 중 하나이다. 이 방법은 단백질을 두 가지 서로 다른 물리화학적 성질, 즉 전하와 분자량에 따라 순차적으로 분리한다. 첫 번째 차원의 분리 방법으로 크로마토포커싱을 사용하는 것이 특징이며, 이는 단백질의 등전점 차이를 이용한다.

1차원 분리인 크로마토포커싱은 이온 교환 크로마토그래피의 원리를 기반으로 한다. pH 구배가 형성된 컬럼을 통해 단백질 시료를 통과시킬 때, 각 단백질은 자신의 등전점에 해당하는 pH 영역에서 전하를 잃고 컬럼에 머무르게 된다. 이를 통해 등전점에 따라 단백질들이 분리된다. 이후 2차원 분리에서는 SDS-PAGE를 수행하여, 1차원에서 분리된 각 단백질을 다시 분자량 크기에 따라 수직 방향으로 한 번 더 분리한다.

이 기법은 특히 등전점이 매우 유사한 단백질들을 미세하게 분리하는 데 강점을 보인다. IEF/SDS-PAGE가 주로 사용되는 광범위한 단백질체학 연구와 비교할 때, Chromatofocusing/SDS-PAGE는 특정 pH 범위 내에서 고해상도 분리가 필요한 표적 분석에 유용하게 적용된다. 이를 통해 복잡한 생물학적 시료 내 단백질의 정량적 발현 차이를 더욱 정밀하게 관찰할 수 있다.

이 방법은 단백질 발현 프로파일 비교, 단백질 변형 검출, 그리고 질병 바이오마커 후보 탐색과 같은 연구 분야에서 활용된다. 그러나 크로마토포커싱 과정이 상대적으로 시간이 많이 소요되며 기술적 최적화가 필요하다는 점에서, 고처리량 분석보다는 특정 연구 질문에 대한 심층 분석에 더 적합한 방법으로 간주된다.

2차원 전기영동은 단백질체학 연구의 핵심적인 분리 기술이다. 이 기법은 세포나 조직에서 추출된 복잡한 단백질 혼합물을 고해상도로 분리하여, 특정 조건 하에서 발현되는 수천 개의 단백질을 한 번에 시각화하고 비교할 수 있게 해준다. 이를 통해 생물학적 상태, 예를 들어 정상 세포와 암 세포 사이의 단백질 발현 차이를 체계적으로 분석할 수 있다.

이 기술의 표준적인 접근법은 등전점 초점화를 1차 분리로, SDS-PAGE를 2차 분리로 사용한다. 첫 번째 차원에서는 단백질이 각자의 등전점에 도달할 때까지 pH 구배 내에서 이동하여 전하에 따라 분리된다. 이후 이 젤 스트립을 두 번째 차원인 SDS-PAGE 젤 위에 놓고, SDS 처리된 단백질이 분자량에 따라 수직으로 다시 분리된다. 그 결과 생성되는 2차원 젤 위의 각 점은 하나의 단백질 종류를 나타낸다.

단백질체학 연구에서 2차원 전기영동은 발현 단백질체학의 기초를 이룬다. 분리된 단백질 스팟의 패턴은 생물정보학 소프트웨어를 이용해 정량 분석되며, 질병 상태나 약물 처리에 따른 단백질 발현량의 증가 또는 감소를 식별하는 데 활용된다. 이렇게 발견된 차등 발현 단백질은 이후 질량 분석법을 통해 동정되어 잠재적인 바이오마커나 치료 표적 후보로 연구된다.

2차원 전기영동은 질병의 진단, 예후 판정, 치료 반응 모니터링에 활용될 수 있는 새로운 바이오마커를 탐색하는 데 핵심적인 도구로 사용된다. 이 기술은 정상 상태와 질병 상태의 세포나 조직, 혈액 혈청과 같은 체액 샘플에서 추출된 복잡한 단백질 혼합물을 고해상도로 분리하여 비교할 수 있게 해준다. 이를 통해 질병 특이적으로 발현 양상이 변화하는 단백질 스폿을 찾아낼 수 있다.

질병 바이오마커 탐색 연구에서는 일반적으로 대조군과 질병군의 샘플을 각각 2차원 전기영동으로 분석하여 생성된 겔 이미지를 비교한다. 단백질체학 소프트웨어를 사용하면 수백에서 수천 개의 단백질 스폿을 정량적으로 비교하여 발현량이 유의미하게 증가하거나 감소한 단백질을 식별할 수 있다. 이렇게 발견된 후보 단백질은 이후 질량 분석법을 통해 동정된다.

이 기술은 특히 암, 신경퇴행성 질환, 심혈관 질환 등 다양한 복합 질환의 바이오마커 발견 연구에 널리 적용되어 왔다. 예를 들어, 난소암이나 전립선암과 같은 특정 암에서만 발견되는 단백질 패턴을 찾아 조기 진단에 활용하려는 연구가 활발히 진행되었다. 또한 치료 전후의 샘플을 비교함으로써 치료 효능과 관련된 바이오마커를 탐색하는 데에도 유용하다.

그러나 발견된 후보 바이오마커의 임상적 유용성을 입증하기 위해서는 대규모 환자 코호트를 대상으로 한 검증 연구가 필수적으로 뒤따라야 한다. 2차원 전기영동은 높은 분해능과 직관적인 결과 제공이라는 장점으로 인해 바이오마커 발견의 초기 단계인 스크리닝 도구로서 여전히 중요한 역할을 하고 있다.

2차원 전기영동은 복잡한 생물학적 샘플 내에서 특정 단백질 간의 결합이나 복합체 형성을 연구하는 데 유용한 도구로 활용된다. 이 기술은 단백질 혼합물을 고해상도로 분리하여, 특정 조건 하에서 함께 이동하거나 그 패턴이 변화하는 단백질 쌍을 식별할 수 있게 해준다. 예를 들어, 리간드와 수용체의 결합이나 단백질 복합체의 구성 요소를 분석할 때 적용할 수 있다.

연구 방법으로는 상호작용을 하는 두 단백질을 함께 처리한 샘플과 개별적으로 처리한 샘플을 2차원 전기영동으로 동시에 진행하여 겔 상의 단백질 스팟 패턴을 비교한다. 상호작용으로 인해 단백질의 전하나 구조가 변하면, 그 등전점이나 겉보기 분자량이 달라져 스팟의 위치가 1차원 또는 2차원 방향으로 이동하게 된다. 이러한 변화를 정량적으로 분석함으로써 상호작용의 존재 유무와 특성을 추론할 수 있다.

이 접근법은 특히 효소와 기질, 또는 항원과 항체와 같은 알려진 상호작용 쌍을 검증하는 데 사용된다. 또한, 약물 표적 단백질을 찾거나 신호 전달 경로에 참여하는 새로운 단백질 파트너를 발굴하는 초기 단계의 스크리닝 기법으로도 가치가 있다. 2차원 전기영동 후, 관심 스팟을 절개하여 질량 분석법으로 동정하면 상호작용하는 단백질의 정체를 확립할 수 있다.

그러나 이 방법은 간접적인 증거를 제공하며, 강한 상호작용만을 검출하는 한계가 있다. 매우 일시적이거나 약한 상호작용, 또는 소수성 막 단백질 간의 상호작용은 분석하기 어려울 수 있다. 따라서, 단백질 상호작용 연구에서는 공동 면역 침전법이나 이종 핵산 가교법과 같은 다른 생화학적 기법들과 보완적으로 사용되는 경우가 많다.

2차원 전기영동의 가장 큰 장점은 단일 차원의 전기영동으로는 불가능한 높은 분해능을 제공한다는 점이다. 1차원 전기영동은 단백질을 분자량 또는 전하 중 한 가지 특성만으로 분리하므로, 크기가 비슷하거나 전하가 비슷한 단백질들은 겹쳐져 분리되지 않는다. 반면, 이 기술은 서로 직교하는 두 가지 독립적인 물리화학적 특성, 즉 등전점과 분자량에 따라 단백질을 순차적으로 분리한다. 이로 인해 수백에서 수천 개에 이르는 단백질을 하나의 겔 상에서 동시에 분리해 낼 수 있으며, 단백질 혼합물의 구성 요소를 훨씬 더 명확하게 시각화할 수 있다.

또 다른 중요한 장점은 정성적 및 정량적 분석이 모두 가능하다는 것이다. 분리된 단백질 스폿의 위치는 해당 단백질의 등전점과 분자량에 대한 정보를 제공하여 정성적 식별의 단서가 된다. 더불어, 각 스폿의 농도는 염색 강도에 비례하므로, 서로 다른 샘플 간의 동일한 단백질 발현량을 비교하는 정량 분석이 가능해진다. 이는 단백질체학 연구에서 질병 상태와 정상 상태의 세포나 조직에서 발현되는 단백질의 차이를 체계적으로 비교하는 데 필수적이다.

이 기술은 유전자 발현 연구를 단백질 수준으로 확장하는 핵심 도구로서의 가치도 지닌다. 유전체학이 유전자의 염기서열과 구조를 다룬다면, 단백질체학은 실제로 기능을 수행하는 단백질의 종류와 양, 변형 상태를 분석한다. 2차원 전기영동은 이러한 포괄적인 단백질 프로파일, 즉 단백질체를 한눈에 보여주는 마스터맵을 생성함으로써, 생물학적 과정이나 질병 메커니즘을 이해하는 데 기여한다. 특히 바이오마커 탐색 연구에서 잠재적 표지 단백질을 발굴하는 데 역사적으로 널리 사용되어 왔다.

2차원 전기영동은 강력한 분리 능력을 갖추고 있지만, 몇 가지 명확한 단점을 지니고 있다. 가장 큰 문제는 작업 과정이 매우 복잡하고 시간이 많이 소요된다는 점이다. 전체 프로토콜에는 샘플 준비, 등전점 초점화, SDS-PAGE 수행, 염색, 영상화 및 데이터 분석 등 많은 단계가 포함되어 있으며, 이 과정은 수일이 걸릴 수 있다. 또한 각 단계마다 최적화가 필요하고, 실험자의 숙련도에 따라 결과의 재현성이 크게 달라질 수 있다.

이 기술은 저발현 단백질이나 소수성 막 단백질과 같은 특정 단백질 클래스를 검출하는 데 어려움이 있다. 고분자량 또는 저분자량 단백질, 극단적인 등전점을 가진 단백질의 분해도도 제한적일 수 있다. 게다가 질량 분석법과 같은 후속 분석을 위해 단백질을 회수하는 것이 쉽지 않으며, 젤 내 단백질 정량의 정확도도 상대적으로 낮은 편이다.

비용 측면에서도 고려해야 할 사항이 많다. 고품질의 양성화제와 염료는 비싸며, 전문적인 영상화 장비와 이미지 분석 소프트웨어도 상당한 투자를 필요로 한다. 이러한 장비와 시약의 비용은 실험 비용을 증가시키는 주요 요인이다.

1차원 전기영동은 단백질 혼합물을 단일 조건, 주로 분자량이나 전하 중 하나의 기준에 따라 분리하는 전기영동 기법이다. 이 방법은 겔 전기영동의 가장 기본적인 형태로, 폴리아크릴아마이드 겔이나 아가로스 겔을 매질로 사용하며, SDS-PAGE나 네이티브 PAGE와 같은 특정 방식으로 수행된다. SDS-PAGE에서는 단백질에 음전하를 균일하게 부여하여 분자량에 따라 분리하는 반면, 네이티브 PAGE는 단백질의 고유 전하와 형태를 유지한 채 분리한다.

1차원 전기영동은 실험 방법이 비교적 간단하고 빠르며, 특정 단백질의 존재 유무나 상대적 발현량을 빠르게 확인하는 데 유용하다. 웨스턴 블롯팅과 같은 후속 분석을 위한 예비 단계로도 널리 사용된다. 그러나 이 방법은 한 번에 하나의 물리화학적 특성만을 분리 기준으로 삼기 때문에, 단백질체와 같이 수백에서 수천 종의 단백질이 섞여 있는 복잡한 샘플을 분석할 때는 분해능이 부족한 한계를 보인다.

이러한 한계를 극복하기 위해 개발된 기술이 2차원 전기영동이다. 2차원 전기영동은 1차원 전기영동을 두 번 연속적으로 적용하는 개념으로, 첫 번째 차원에서는 등전점 초점화를 통해 단백질을 등전점에 따라 분리하고, 두 번째 차원에서는 SDS-PAGE를 통해 분자량에 따라 다시 분리한다. 이를 통해 단일 차원으로는 구분되지 않았던 단백질들을 높은 분해능으로 분리해낼 수 있다.

질량 분석법은 단백질이나 펩타이드와 같은 생체 분자의 질량을 정밀하게 측정하고 분석하는 강력한 분석 기술이다. 이 기술은 2차원 전기영동으로 분리된 단백질 스폿을 더욱 심층적으로 분석하는 데 핵심적인 역할을 한다. 2차원 전기영동 겔에서 절개된 단백질 스폿은 트립신과 같은 효소로 처리되어 펩타드로 분해된 후, 질량 분석기에 주입된다. 이를 통해 단백질의 정확한 분자량을 측정하고, 데이터베이스 검색을 통한 동정이 가능해진다.

질량 분석법은 특히 단백질체학 연구에서 2차원 전기영동과 연계되어 광범위하게 활용된다. 2차원 전기영동이 복잡한 샘플로부터 수백에서 수천 개의 단백질을 물리적으로 분리하여 시각화한다면, 질량 분석법은 각각의 단백질을 정성 및 정량적으로 분석하는 다음 단계를 담당한다. 이 조합은 발현 단백질체학 연구, 예를 들어 정상 세포와 암 세포 간의 단백질 발현 차이를 비교하는 데 필수적이다.

주로 사용되는 질량 분석법에는 MALDI-TOF와 액체 크로마토그래피-탠덤 질량 분석법(LC-MS/MS) 등이 있다. MALDI-TOF는 비교적 빠르고 고처리량으로 단백질을 동정하는 데 적합한 반면, LC-MS/MS는 더 복잡한 샘플의 심층 분석과 변형 후 번역적 조절 연구에 강점을 보인다. 이러한 기술의 발전으로 2차원 전기영동 기반 분석의 정확도와 처리 능력이 크게 향상되었다.

결론적으로, 질량 분석법은 2차원 전기영동으로 얻은 분리 결과에 대한 정밀한 분석을 제공함으로써, 단순한 단백질 분리를 넘어서 기능적 연구와 바이오마커 발견으로 이어지는 통합적 분석 파이프라인의 핵심 구성 요소이다.

서던 블롯팅은 DNA를 분석하기 위한 분자생물학 기법이다. 이 기술은 전기영동으로 크기에 따라 분리된 DNA 단편을 고체 지지체인 니트로셀룰로오스 멤브레인이나 나일론 멤브레인으로 옮긴 후, 특정 DNA 서열을 가진 단편만을 탐지하는 데 사용된다. 서던 블롯팅은 유전자 구조 분석, 유전자 지도 작성, 돌연변이 검출 등 다양한 분야에서 핵심적인 도구로 활용된다.

이 기법의 과정은 먼저, 제한 효소로 절단한 DNA 샘플을 아가로스 겔 전기영동을 통해 분자량 크기 순으로 분리하는 것으로 시작한다. 이후 모세관 현상을 이용한 방법으로 DNA 단편을 겔에서 멤브레인으로 옮기는데, 이 과정을 블롯팅이라고 한다. 멤브레인에 고정된 DNA는 이후 방사성 동위원소나 형광 물질로 표지된 DNA 탐침과 혼성화 반응을 통해 특정 서열을 찾아낸다.

서던 블롯팅은 DNA 지문 분석과 같은 법의학적 응용부터 유전병 진단에 이르기까지 광범위하게 사용되었다. 이 기술의 이름은 이를 처음 개발한 영국의 생물학자 에드윈 서던의 이름에서 유래하였다. 서던 블롯팅의 성공 이후, RNA를 분석하는 노던 블롯팅과 단백질을 분석하는 웨스턴 블롯팅과 같은 유사한 원리의 블롯팅 기술들이相继 개발되었다.